Les proteïnes realitzen reaccions bioquímiques complexes i han de tenir una estructura espacial tridimensional especial quan es realitzen funcions microbianes. Després de la generació microbiana, les proteïnes pròpies també experimenten processos fisiològics complexos de primera mà. En experiments bioquímics, sovint és necessari realitzar investigacions científiques sobre desnaturalització de proteïnes. El clorhidrat de guanidina i la urea són els reactius experimentals més utilitzats en la desnaturalització de proteïnes. Quines diferències hi ha entre tots dos? Com triar a l'experiment?
A causa de l'eficàcia dels factors externs, la conformació de les molècules de proteïnes naturals pures experimenten canvis anormals, donant lloc a la pèrdua d'activitat biològica i canvis anormals en les seves propietats físiques i químiques. Aquest tipus de situació s’anomena desnaturalització de proteïnes. La transducció pot implicar la ruptura d’enllaços secundaris i enllaços disulfur, però no la ruptura d’enllaços de pèptids a l’estructura primària.
Les proteïnes transgènere de la guanidina i la urea transgènere contenen dos sistemes: el primer sistema és la fusió preferencial de proteïnes transgènere amb clorhidrat de guanidina i urea, produint òxids nítrics sintasa. Quan s’elimina l’òxid nítric sintasa, reflecteix un canvi d’equilibri, acompanyat d’un augment de la concentració de l’agent desnaturalitzador. La proteïna en condicions naturals pures continua canviant en l’òxid nítric sintasa, donant lloc a un transgènere de proteïnes complet; El segon sistema és l'efecte de solubilització del clorhidrat de guanidina i la urea en els residus d'aminoàcids hidrofòbics. A causa de la capacitat del clorhidrat de guanidina i de la urea de formar enllaços covalents, els enllaços covalents del clorhidrat de guanidina i la urea han de trencar -se en solucions d'alta concentració (4-8 mol/l). Com a resultat, el clorhidrat de guanidina i la urea es converteixen en bons dissolvents orgànics per a residus no polars, provocant que els residus hidrofòbics dins de l'estructura molecular de proteïna es flexionin i augmentin la solubilitat, donant lloc a diferents nivells de desnaturalització de proteïnes.
La diferència entre tots dos en la conversió de proteïnes:
Valor de concentració: a temperatura interior, 3-2 mol/L El clorhidrat de guanidina pot fer que les proteïnes esfèriques canviïn del seu estat natural al centre del seu estat de transformació. Generalment, l’augment del valor de concentració de l’agent desnaturalitzador pot millorar el nivell de transformació i uns 6mol/L clorhidrat de guanidina pot canviar completament la proteïna al seu estat de transformació. El clorhidrat de guanidina té una capacitat de desnaturalització més forta que la urea per les seves propietats catiòniques. Algunes proteïnes esfèriques no es poden transformar completament ni en una solució de 8 mol/L, sense saber que generalment existeixen en una conformació enrotllada irregularment (completament transformada) en una solució de clorhidrat de guanidina de 8 mol/L.
Solubilitat: La solubilitat de la urea és més lenta i més feble que la del clorhidrat de guanidina, amb una solubilitat del 70%~ 90%. Quan la urea té un temps d’eficàcia més llarg o una temperatura superior, s’esquerda per produir cianat, que decora els grups hidroxil de proteïnes recombinants d’actius mitjançant enllaços covalents. Tanmateix, té els avantatges de no ser dèbils en els electròlits, la neutralització i el baix cost; El clorhidrat de guanidina té una solubilitat de més del 95% i un efecte de fusió ràpida sense provocar una decoració d’enllaços covalents de proteïnes recombinants d’actius. Tot i això, té desavantatges com un cost més elevat en comparació amb la urea, la instal·lació fàcil sota els estàndards àcids i alcalins i un impacte potencial en els experiments post hoc.
En general, com que els reactius experimentals comuns en els processos de desnaturalització de proteïnes, els avantatges i els desavantatges del clorhidrat de guanidina i la urea són els següents: El clorhidrat de guanidina té una solubilitat i una transferibilitat relativament fortes, cosa que fa que sigui menys probable que causi una decoració covalent de proteïnes recombinants d’actius. Tot i això, té inconvenients com un augment del cost, la resolució fàcil sota els estàndards d’àcid i l’impacte en l’anàlisi de la cromatografia d’intercanvi d’ions proteïnes; La urea té una solubilitat relativament pobra, però té avantatges com no ser un electròlit feble, ser neutre, baix cost i no provocar fàcilment que moltes proteïnes s’instal·lin després del replegament de proteïnes. En experiments específics, els investigadors científics han de seleccionar en funció dels estàndards i objectius per obtenir els millors resultats experimentals.